Глава 7. Методы исследования белков

 

Среди методов, используемых в биохимии, ключевое значение имеют выделение веществ из биологических источников и, как правило, их очистка с целью получения индивидуальных соединений.

Следует отметить три главные проблемы выделения в индивидуальном виде компонентов из живых организмов:

1) Исходный материал биомасса состоит из многих сотен и даже тысяч различных соединений. Разделение таких смесей чрезвычайно сложно, кроме того многие компоненты этих смесей построены довольно однотипно (например, иммуноглобулины). В связи с этим они мало различаются между собой по физико-химическим характеристикам - растворимости или способности к сорбции на определенном типе сорбента.

2) Работа с биохимическими объектами зачастую сопровождается необходимостью манипулировать с очень небольшими количествами исходного вещества. При ничтожно малом количестве используемого материала методы их детекции должны быть высокочувствительными. Такими методами являются спектрофотометрические методы, основанные на измерении поглощения видимого или ультрафиолетового света, радиохимические методы, основанные на изменении радиоактивности, и люминесцентные, основанные на изменении флуоресценции, био- и хемилюминесценции.

3) Многие компоненты обладают очень низкой устойчивостью. Часто задача состоит в том, чтобы выделить белок в нативном, т.е. сохраняющим биологическую активность состоянии. Между тем многие белки при умеренных температурах и незначительных изменениях рН среды подвержены денатурации, которая обычно сопровождается потерей биологической активности -инактивацией. Кроме того, в клетках часто имеются ферменты (в неповрежденных клетках в лизосомах) способные разрушить те или иные вещества, в первую очередь белки.